Smiltyninių šlamučių (Helichrysum arenarium L.) augalų fenolinių junginių ir antioksidacinio aktyvumo tyrimas

Arūno Jankausko magistro baigiamasis darbas/mokslinis vadovas doc. dr. Raimondas Benetis; Lietuvos sveikatos mokslų universiteto, Farmacijos fakulteto, Vaistų chemijos katedra. – Kaunas. Smiltyninių šlamučių (Helichrysum arenarium L.) augalų fenolinių junginių ir antioksidacinio aktyvumo tyrimas. Tikslas - ištirti iš skirtingų Lietuvos regionų surinktų, natūraliai augančių smiltyninių šlamučių (Helichrysum arenarium L.) augalinių žaliavų bendrąjį fenolinių junginių, fenolio rūgščių ir flavonoidų kiekį bei jų ekstraktų antioksidacinį aktyvumą. Darbo uždaviniai. 1. Parinkti fenolinių junginių ekstrakcijos sąlygas iš smiltyninio šlamučio (H. arenarium) žaliavų. 2. DPPH ir ABTS metodais įvertinti smiltyninių šlamučių (H. arenarium) ekstraktų antiradikalinį aktyvumą. 3. Įvertinti smiltyninių šlamučių (H. arenarium) chelatines ir redukcines savybes, taikant dvivalentės geležies jonų sujungimo ir FRAP metodus. 4. Ištirti iš skirtingų cenopopuliacijų surinktų smiltyninių šlamučių (H. arenarium) žiedų, stiebų, lapų flavonoidų, fenolio rūgščių ir fenolinių junginių kiekį ir įvertinti jų rodmenų kitimus. 5. Įvertinti koreliaciją tarp H. arenarium augalinių žaliavų bendro fenolinių junginių, flavonoidų ir fenolio rūgščių kiekių bei jų ekstraktų antioksidacinio aktyvumo. Tyrimo metodika. Tyrimui atlikti buvo naudojamos natūraliai augančių smiltyninių šlamučių (Helichrysum arenarium L.) augalinės žaliavos (žiedai, lapai, stiebai), kurios buvo surinktos iš 17 skirtingų Lietuvos teritorijoje esančių augaviečių masinio žydėjimo laikotarpiu. Ekstrakcijos metodas – ekstrakcija ultragarsu. Naudojamas 80% (V/V) etanolio ir vandens mišinys, ekstrakcijos laikas 10 min, ekstrakcijos temperatūra – 60 oC. Bendrajam fenolinių junginių kiekybiniam nustatymui naudotas spektrofotometrinis Folin-Ciocalteu metodas, rezultatai išreiškiami galo rūgšties ekvivalentais (GRE) (mg/g). Bendras flavonoidų kiekis nustatomas vykdant reakciją su AlCl3, rezultatai išreikšti rutino ekvivalentais (RE) (mg/g). Bendram fenolinių rūgščių kiekybiniam nustatymui naudotas Arnow reagentas. Antioksidaciniam aktyvumui nustatyti naudojami spektrofotometriniai DPPH, FIC, ABTS ir FRAP metodai. Rezultatai ir išvados. Atlikus tyrimus, nustatyta, kad fenolinių junginių, fenolio rūgščių ir flavonoidų kiekiai varijavo priklausomai nuo augalo morfologinės dalies. Didžiausi kiekiai šių medžiagų aptikti H. arenarium žiedų žaliavose (vidutiniškai 27,957 ± 2,013 mg/g; 58,34 ± 2,31 mg/g; 36,662 mg/g), o mažiausi - stiebuose (12,11 mg/g; 18,506 mg/g; 7,75 mg/g). In vitro modelinėse sistemose nustatyta, kad H. arenarium ekstraktai pasižymi antiradikaliniu aktyvumu. Didžiausias aktyvumas nustatytas H. arenarium žiedų žaliavose (vidutiniškai DPPH surišimas – 64,288 %; ABTS – 66,992 µmol/l; FRAP – 42,399 µmol/l). Atliekant chelatų surišimo metodą (FIC), reikšmingi rezultatai gauti H. arenarium žiedų žaliavose, žaliava vidutiniškai radikalus suriša - 69,232 %.

Arūnas Jankauskas master`s thesis. Scientific supervisor: doc. dr. Raimondas Benetis; Lithuanian University of health sciences, faculty of pharmacy, Department of drug chemistry. – Kaunas. The investigation of phenolic compounds and antioxidant activity of sand everlasting (Helichrysum arenarium L.) plants. The aim: To examine overall quantity of phenolic compounds and ammount of flavonoids as well as antioxidant activity found in sand everlast‘s (Helichrysum arenarium L.) raw materials (leafs, stems and petals), that are found naturaly growing in different regions of Lithuania. Tasks: 1. Prepare optimal conditions for extraction from the biomass of drwarf everlast (Helichrysum arenarium L.) 2. Evaluate antiradical activity of extracts from sand everlast (Helichrysum arenarium L.) using DPPH and ABTS methods. 3. Evaluate sand everlast‘s (Helichrysum arenarium L.) chelating and reducing properties by applying divalent iron ion coupling. 4. Analyse the ammount and fluctuation of flavonoid, phenolic acids phenolic compounds in sand everlast‘s (Helichrysum arenarium L.) petals, stems and leafs, that are gathered from different cenopopulations. 5. Evaluate the sand everlat‘s(Helichrysum arenarium L.) antidioxin activity correlation between general ammount of phenolic compounds, acids and flavanoid compounds of the biomass and the extracts. Metodology of investigation:. Research was done by using biomass(leaves, petals and stems) of sand everlast (Helichrysum arenarium L.) gathered from it‘s natural growing sites in 17 different regions in Lithuania, during flowering period. Method of extraction – extraction by ultrasound. Used 80% (V/V) ethanol, duration of extraction – 10 minutes, temperature of extraction - 60 oC. Spectrophotometric method of Folin-Ciocalteu was used to sum up the overall amount of phenolic coumpounds, results are expressed in galic acid equivalent‘s (GE) (mg/g). Overall ammount of flavonoids is measured by performing reaction with AlCl3, results are registered in Rutin equivalents. Arnow reagent was used to measure overall ammount of phenolic acids. DPPH, FIC, ABTS ir FRAP spectrophotometric methods were used to evaluate the antidioxin activity. Results and conclusions: After the research, results were established, that ammounts of phenolic compounds, phenolic acids and flavonoids fluctuated depending on morphological part of the plant. Bigest ammounts of these substances were found in H. arenarium biomass of the petals (average 27,957±2,013 mg/g; 58,34±2,31 mg/g ; 36,662 mg/g), smallest - in the stems (12,11 mg/g; 18,506 mg/g; 7,75 mg/g). In vitro modular systems, it‘s established, that H. arenarium extracts are characterized by antiradical activity. Highest activity is measured in biomass of H. arenarium petals averaged (DPPH connection – 64,288%; ABTS – 66,992 µmol/l; FRAP – 42,399 µmol/l). Performing chelat connection method(FIC), important results were found in biomass of H. Arenarium petals, biomass radical connection – 69,232%