Lactococcus lactis padermių, išskirtų iš žuvies, identifikavimas ir mikrobiologinės saugos savybių įvertinimas
Kavaliauskaitė, Kamilė |
Recenzentas / Reviewer | |
Recenzentas / Reviewer | |
Komisijos pirmininkas / Committee Chairman | |
Komisijos sekretorius / Committee Secretary | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member |
Pienarūgštės bakterijos (PRB) yra puikiai žinomi probiotikai, kurie gerina produkto mikrobiologinės kokybės ir saugos savybes. Probiotikai dažnai yra įvardijami kaip galima alternatyva kontroliuojant antibiotikus ir užkertant kelią patogeninių bakterijų plitimui. PRB gali gaminti įvairius antimikrobinius agentus, kurie turi stiprų antagonistinį aktyvumą prieš įvairius patogeninius mikroorganizmus. Nors PRB šaltinis dažniausiai yra pieno, sūrio ir kiti produktai, pastaraisiais metais vis daugiau dėmesio sulaukia ir žuvys, kaip galimas pienarūgščių bakterijų šaltinis. Tyrimo metu buvo atliktas Lactococcus lactis bakterijų išskyrimas iš žuvies vidaus organų (europinio šapalo, paprastosios raudės ir paprastosios kuojos). Iš viso 45 mėginiai buvo homogenizuoti, praskiesti dešimtkarčiais skiedimais iki 10-7 ir užsėti ant PCA agaro su priedais. Sekančiame etape atliktas dažymas Gramo būdu, po kurio, mikroskopo pagalba, atsižvelgiant į savybes (rutulio formos bakterijos, aptinkamos pavienės arba trumpose kokų grandinėlėse), vizualiai buvo nustatomos Lactococcus spp. bakterijos. Išskirtos Lactococcus spp. buvo įvertintos PGR metodu, kuomet ieškant specifinio 380 bp fragmento buvo identifikuotos L. lactis padermės. Paskutiniame etape įvertinamas pasitvirtinusių L. lactis bakterijų jautrumas prieš 9 antibiotikus (vankomiciną (VA), ampiciliną (AMP), gentamiciną (CN), kanamiciną (K), streptomiciną (S), eritromiciną (E), klindamiciną (CD), tetracikliną (TE), chloramfenikolį (C)) taikant E - testą. Tyrimo metu Lactococcus spp. bakterijos buvo nustatytos 36 (80 proc.) visų tirtų žuvies vidaus organų mėginių. PGR reakcijos metu L. lactis padermės nustatytos tik 3 iš 36 tirtų Lactococcus spp. Vertinant L. lactis padermių antimikrobinį atsparumą prieš antibiotikus nustatyta, kad visos trys padermės buvo jautrios ampicilinui (MSK nuo 0,19 µg/ml iki 0,38 µg/ml), gentamicinui (MSK nuo 0,19 µg/ml iki 0,25 µg/ml), kanamicinui (MSK nuo 1 µg/ml iki 2 µg/ml), streptomicinui (MSK nuo 3 µg/ml iki 6 µg/ml), eritromicinui (MSK nuo 0,064 µg/ml iki 0,125 µg/ml), klindamicinui (MSK nuo 0,016 µg/ml iki 0,19 µg/ml), tetraciklinui (MSK 2 µg/ml), chloramfenikoliui (MSK nuo 2 µg/ml iki 6 µg/ml) (p<0,001), tačiau buvo visiškai atsparios vankomicinui (MSK 256 µg/ml) (p ≥ 0,05).
Lactic acid bacteria (LAB) are well known probiotics which improve microbiological quality and safety of a product. Probiotics are often mentioned as an alternative to antibiotics in case of controlling and preventing of pathogenic bacteria. LAB can produce various antimicrobial agents which have strong antagonistic activity against different pathogenic microorganisms. Although most common LAB sources are dairy, cheese and other products, for the last few years more attention is focused to the fish as a possible source of lactic acid bacteria. Lactococcus lactis bacteria were isolated from internal organs of fish (uropean chub, common rudd and common roach) in this study. In total 45 samples were homogenized, diluted in ten-fold dilutions till 10-7 and inoculated into a Plate count agar with supplements. During the next stage Gram staining was performed and Lactococcus spp. were visually detected with the microscope, based on the properties like spherical forms of bacteria, a single or short chains of cocci. Lactococcus spp. were tested with the PCR assay for a specific 380 bp fragment to identify L. lactis strains. At the last stage confirmed L. lactis strains there tested to antimicrobial resistance by E-test with 9 antibiotics (vancomycin (VA), ampicillin (AMP), gentamicin (CN), kanamycin (K), streptomycin (S), erythromycin (E), clindamycin (CD), tetracycline (TE), chloramphenicol (C)). Lactococcus spp. were detected in 36 (80 %) out of 45 examined internal fish organs samples. Based on PCR results L. lactis was confirmed only in 3 out of 36 tested Lactococcus spp. Antimicrobial resistance revealed that all three L. lactis strains were susceptible to ampicillin (MIC from 0.19 µg/ml up to 0.38 µg/ml), kanamycin (MIC from 1 µg/ml up to 2 µg/ml), streptomycin (MIC from 3 µg/ml up to 6 µg/ml), erytromycin (MIC from 0.064 µg/ml up to 0.125 µg/ml) clindamycin (MIC from 0.016 µg/ml up to 0.19 µg/ml), tetracycline (MIC 2 µg/ml), chloramphenicol (MIC from 2 µg/ml up to 6 µg/ml) (p < 0.001), although they were completely resistant to vancomycin (MIC 256 µg/ml) (p ≥ 0.05).