SULT1A1 ir UGT1A1 polimorfizmų reikšmė gimdos kaklelio vėžiu sergančioms pacientėms

Tikslas: Įvertinti SULT1A1 ir UGT1A1 genų polimorfizmų prognostinę reikšmę pacienčių, sergančių gimdos kaklelio vėžiu, grupėje Uždaviniai:

1. Nustatyti SULT1A1 ir UGT1A1 polimorfizmų alelių ir genotipų pasiskirstymą pacienčių, sergančių gimdos kaklelio vėžiu, grupėje. 2. Išanalizuoti SULT1A1 ir UGT1A1 polimorfizmų sąsajas su naviko klinikinėmis – morfologinėmis savybėmis. 3. Nustatyti šių polimorfizmų ryšį su gimdos kaklelio vėžiu sergančių pacienčių ligos eiga. Tyrimo dalyviai: Į tyrimą buvo įtrauktos 169 gimdos kaklelio vėžiu sergančios pacientės, kurių kraujo mėginiai buvo surinkti Lietuvos sveikatos mokslų universiteto Kauno klinikose nuo 2014 m. iki 2020 m. Iš mėginių išskirta DNR buvo kaupiama ir vis dar yra laikoma Onkologijos Instituto audinių banke. Tyrimams atlikti gautas Kauno regioninio biomedicininių tyrimų etikos komiteto (protokolas Nr. BE-2-10 ir Nr. P1-BE-2-10/2014) ir Lietuvos sveikatos mokslų universiteto bioetikos centro (BEC-MF-305) sutikimai. Metodika: Tyrimo metu tirti SULT1A1 rs1042028 ir UGT1A1 rs5839491 polimorfizmai. SULT1A1 rs1042028 tirtas polimerazinės grandininės reakcijos restrikcinių fragmentų ilgio polimorfizmo metodu (PGR-RFLP) metodu, o UGT1A1 rs5839491 polimerazinės grandininės reakcijos (PGR) metodu. Fragmentų vizualizavimas atliktas agarozės gelio elektroforezės ir poliakrilamido gelio elektroforezės būdu, atitinkamai. Duomenų analizė atlikta naudojant SPSS 23.0 statistinį duomenų paketą. Tyrimo rezultatai: SULT1A1 rs1042028 polimorfizmo AA genotipą turėjo 15,4 %, AG genotipą – 46,2 %, GG genotipą – 38,4 % visų pacienčių. A alelis nustatytas 38,5 %, o G alelis – 61,5 % visų tiriamųjų. UGT1A1 rs5839491 polimorfizmo 6/6 genotipą turėjo 36,7 %, 6/7 genotipą – 52,1 %, o 7/7 genotipą – 11,2 % visų tiriamųjų. 6 alelis arba 7 alelis buvo nustatytas 62,7 % arba 37,3 % visų tiriamųjų, atitinkamai. Šiame tyrime rasta statistiškai reikšminga sąsaja tarp SULT1A1 rs1042028 ir naviko diferenciacijos laipsnio (G) (Chi-kvadrato testas; p = 0,025). Veinveiksnė logistinė regresinė analizė parodė, statistiškai reikšmingą ryšį tarp A alelio turėtojų ir naviko diferenciacijos laipsnio G3 (OR = 2,041, 95% CI 1,021-4,081, p = 0,044). Visgi, daugiaveiksnės logistinės regresijos analizės metu ši sąsaja neišliko, o tai rodo, kad G3 pasireiškimą daugiau lemia kiti veiksniai. Nors tarp SULT1A1 rs1042028 polimorfizmo genotipų ir metastazių į limfmazgius (N) nustatyta ribinė p reikšmė (Chi-kvadrato testas; p = 0,051), vienveiksnė logistinės regresijos analizė parodė, kad AA genotipo nešiotojos turėjo didesnę riziką metastazių limfmazgiuose atsiradimui (OR = 3,008, 95% CI 1,136-7,965, p = 0,027), nei AG genotipo nešiotojos. Atliekant daugiaveiksnę logistinę regresinę analizę ši sąsaja taip pat prarado savo reikšmingumą. Reikšmingas ryšys buvo pastebėtas tarp UGT1A1 rs5839491 ir pacienčių amžiaus diagnozės nustatymo metu (p = 0,029). Pacientėms, turinčioms 6/6 genotipą, buvo mažesnė riziką, jog joms bus diagnozuotas GKV 58 ar daugiau metų (OR = 0,200, 95% CI 0,308-1,866, p = 0,018) lyginant su 7/7 genotipą turinčiomis. Taip pat 6 (A(TA)6TAA) alelio nešiotojoms buvo santykinai mažesnė rizika, jog joms bus diagnozuotas GKV sulaukus 58 ar daugiau metų (OR = 0,203, 95% CI 0,057-0,726, p = 0,014). Atliekant daugiaveiksnę logistinę regresiją šios sąsajos išliko statistiškai reikšminga, dėl to galima daryti prielaidą, kad šis polimorfizmas yra nepriklausomas veiksnys. Tyrimo metu sąsajų tarp SULT1A1 rs1042028 ir UGT1A1 rs5839491 bei bendro išgyvenamumo ir išgyvenamumo be progreso nebuvo nustatyta (p > 0,05). Išvados: Ištyrus SULT1A1 rs1042028 gimdos kaklelio vėžiu sergančių pacienčių grupėje, nustatyta, kad AG genotipas buvo dažniausias, o AA – rečiausias. G alelis pasireiškė dažniau negu A alelis. UGT1A1 rs5839491 polimorfizmo 6/7 genotipas pasireiškė dažniausiai, o 7/7 genotipas rečiausiai. 6 alelis pasireiškė dažniau negu 7 alelis. Statistiškai reikšmingos sąsajos nustatytos tarp SULT1A1 rs1042028 ir naviko diferenciacijos laipsnio (G), bei tarp UGT1A1 rs5839491 su pacienčių amžiumi. Statistiškai reikšminga sąsaja su išgyvenamumu ir išgyvenamumu be progreso nerasta.

Tasks: 1. To determine the distribution of alleles and genotypes of SULT1A1 and UGT1A1 polymorphisms in a group of patients with cervical cancer. 2. To analyze the associations of SULT1A1 and UGT1A1 polymorphisms with tumor clinical – morphological characteristics. 3. To determine the relationship between these polymorphisms and the course of the disease in cervical cancer patients. Study participants: in this study 169 cervical cancer patients were included. Blood samples of the patients were collected in Kaunas clinics of the Lithuanian University of Health Sciences since 2014. until 2020 The DNA extracted from the samples were stored and is still stored in the tissue bank of the Oncology Institute. The consents of the Kaunas Regional Biomedical Research Ethics Committee (protocol No. BE-2-10 and No. P1-BE-2-10/2014) and the Bioethics Center of the Lithuanian University of Health Sciences (BEC-MF-305) were obtained for the research. Methodology: the study investigated the SULT1A1 rs1042028 and UGT1A1 rs5839491 polymorphisms. SULT1A1 rs1042028 was analyzed by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method, and UGT1A1 rs5839491 by polymerase chain reaction (PCR) method. Fragments were visualized by agarose gel electrophoresis and polyacrylamide gel electrophoresis, respectively. Data analysis was performed using the SPSS 23.0 statistical data package. Research results: SULT1A1 rs1042028 polymorphism had the AA genotype in 15,4%, the AG genotype – 46,2%, and the GG genotype – 38,4% of all patients. The A allele was found in 38,5% and the G allele in 61,5% of all subjects. UGT1A1 rs5839491 polymorphism had genotype 6/6 in 36,7%, genotype 6/7 – 52,1%, and genotype 7/7 – 11,2% of all subjects. Allele 6 or allele 7 was detected in 62,7% or 37,3% of all subjects, respectively. This study found a statistically significant association between SULT1A1 rs1042028 and tumor differentiation grade (G) (Chi-square test; p = 0,025). Factorial logistic regression analysis shows a statistically significant association between A allele holders and tumor differentiation grade G3 (OR = 2,041, 95% CI 1,021-4,081, p = 0,044). However, this association did not persist in multivariate logistic regression analysis, suggesting that other factors are responsible for the occurrence of G3. Although there was a marginal p-value (Chi-square test; p = 0,051) between SULT1A1 rs1042028 polymorphism genotypes and lymph node metastasis (N), univariate logistic regression analysis showed that carriers of the AA genotype had a higher risk of lymph node metastasis (OR = 3,008, 95 % CI 1.136-7,965, p = 0,027), than AG genotype carriers. This association also lost significance in multivariable logistic regression analysis. A significant association was observed between UGT1A1 rs5839491 and patient age at diagnosis (Chi-square test; p = 0,029). Patients with the 6/6 genotype had a lower risk of being diagnosed with cervical cancer at age 58 or later (OR = 0,200, 95% CI 0,308-1,866, p = 0,018) compared to those with the 7/7 genotype. Also, carriers of the 6 (A(TA)6TAA) allele had a relatively lower risk of being diagnosed with cervical cancer at age 58 or later (OR = 0,203, 95% CI 0,057-0,726, p = 0,014). In multivariate logistic regression, these associations remained statistically significant, suggesting that this polymorphism is an independent factor. In the study, no associations were found between SULT1A1 rs1042028 and UGT1A1 rs5839491 and overall and progression-free survival (p > 0,05). Conclusions: study of SULT1A1 rs1042028 in a cohort of cervical cancer patients revealed that the AG genotype was the most common and AA the least frequent. The G allele appeared more often than the A allele. The 6/7 genotype of the UGT1A1 rs5839491 polymorphism was the most frequent, and the 7/7 genotype was the least frequent. Allele 6 appeared more common than allele 7. Statistically significant associations were found between SULT1A1 rs1042028 and tumor differentiation grade (G), and between UGT1A1 rs5839491 and patient age. No statistically significant association with survival and time to progression was found.