MiR-141-3p ir miR-200b-3p reikšmė virškinamojo trakto stromos navikų patogenezėje
Recenzentas / Reviewer | |
Konsultantas / Consultant | |
Eidukaitė, Audronė | Komisijos pirmininkas / Committee Chairman |
Baranovaitė, Gerda | Komisijos narys / Committee Member |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member |
Šio magistrinio darbo tikslas – nustatyti miR-141-3p ir miR-200b-3p reikšmę virškinamojo trakto stromos navikų patogenezėje. Tikslui pasiekti buvo suformuluoti darbo uždaviniai:
- Nustatyti miR-141-3p ir miR-200b-3p potencialių genų taikinių raiškos pokyčius po poveikio mikro-RNR imitatoriais;
- Įvertinti pasirinktų potencialių miR-141-3p ir miR-200b-3p genų taikinių raiškos pokyčius baltymų lygmenyje po poveikio mikro-RNR imitatoriais;
- Nustatyti GIST-T1 ląstelių gyvybingumo pokyčius po poveikio miR-141-3p ir miR-200b-3p imitatoriais;
- Ištirti GIST-T1 ląstelių migracijos pokyčius po poveikio miR-141-3p ir miR-200b-3p imitatoriais.
Tyrimo objektas – virškinamojo trakto stromos navikuose pakitusios raiškos mikro-RNR. GIST-T1 ląstelių linija buvo naudojama kaip tinkama sistema pasirinktam objektui studijuoti. Tyrimų rezultatai parodė, kad STAT5A ir STAT5B genų raiška sumažėjo GIST-T1 ląsteles paveikus miR-141-3p imitatoriumi, tačiau STAT5B raiškos pokyčiai baltymų lygmenyje nebuvo nustatyti. Genų raiškos analizė parodė, kad miR-200b-3p galimi genai taikiniai – EGFR ir ETV1. Baltymų raiškos analizės metu buvo nustatyta, kad miR-200b-3p poveikis lėmė reikšmingą EGFR kiekio sumažėjimą. Fiziologiniai GIST-T1 ląstelių tyrimai paveikus miR-141-3p ir miR-200b-3p imitatoriais parodė, kad šios mikro-RNR turėjo skirtingą įtaką ląstelių atsakui. Padidinus miR-200b-3p raišką ląstelėje buvo reikšmingai slopinami fiziologiniai procesai, t.y. ląstelių gyvybingumas, proliferacija ir migracija. Padidinus miR-141-3p raišką ląstelėse buvo nustatytas GIST-T1 ląstelių gyvybingumo ir proliferacijos padidėjimas, o įtakos migracijai nebuvo. Apibendrinant rezultatus galima teigti, kad miR-141-3p ir miR-200b-3p gali turėti svarbų vaidmenį GIST patogenezėje, tačiau reikalingas detalesnis šių mikro-RNR taikinių ištyrimas ir tiesioginių sąsajų įrodymas.
The aim of this study was to assess the functional role of miR-141-3p and miR-200b-3p in pathogenesis of gastrointestinal stromal tumors. Therefore, study objectives were defined:
- Determine the expression of selected target genes of miR-141-3p and miR-200b-3p after treatment with mimics of these micro-RNAs;
- Determine the expression of selected target proteins of miR-141-3p and miR-200b-3p after treatment with mimics of these micro-RNAs;
- Determine viability changes in GIST-T1 cell line after exposure to miR-141-3p and miR-200b-3p mimics;
- Determine migration changes in GIST-T1 cell line after exposure to miR-141-3p and miR-200b-3p mimics.
The object of this study – micro-RNAs of deregulated expression in GISTs. GIST-T1 was selected as suitable system for this research. First of all, expression changes of potential target genes for miR-141-3p and miR-200b-3p were analyzed. Gene expression analysis showed that STAT5A and STAT5B decreased after treatment of GIST-T1 with miR-141-3p mimics, but no STAT5B changes were observed on protein expression level. Subsequent analysis of miR-200b-3p target genes revealed that EGFR and ETV1 may be potential targets. Further, protein expression analysis has shown that miR-200b-3p overexpression resulted in decrease of EGFR amount. In addition, physiological response of GIST-T1 cells to miR-141-3p and miR-200b-3p overexpression was measured. Overexpression of miR-200b-3p significantly reduced cells viability, proliferation and migration. In contrast, overexpression of miR-141-3p increased cells viability and proliferation, but did not affect cells migration. In conclusion, miR-141-3p and miR-200b-3p have significant role in GIST pathogenesis. However, further research analyzing their target genes and showing direct gene-microRNA relationship is needed.