Diazepamo ir jo metabolitų dujų chromatografijos-masių spektrometrijos palyginamoji bioanalizė taikant skirtingą jonizaciją teismo toksikologijos praktikoje

Kazlauskas, Tautvydas

Use this url to cite ETD: https://hdl.handle.net/20.500.12512/100752

Diazepamo ir jo metabolitų dujų chromatografijos-masių spektrometrijos palyginamoji bioanalizė taikant skirtingą jonizaciją teismo toksikologijos praktikoje

Type of publication

type::text::thesis::master thesis

Title

Diazepamo ir jo metabolitų dujų chromatografijos-masių spektrometrijos palyginamoji bioanalizė taikant skirtingą jonizaciją teismo toksikologijos praktikoje

Other Title

Comparative gas chromatography-mass spectrometry bioanalysis of diazepam and its metabolites using different ionization in forensic toxicology practice

Author

Kazlauskas, Tautvydas

MA Farmacijos fakultetas (U510000)

Advisor

Ževžikovas, Andrejus

Other(s)

Benetis, Raimondas	Recenzentas / Reviewer
Juškaitė, Vaida	Komisijos sekretorius / Committee Secretary
Briedis, Vitalis	Komisijos pirmininkas / Committee Chairman
Raudonė, Lina	Komisijos narys / Committee Member
Savickas, Arūnas	Komisijos narys / Committee Member
Radžiūnas, Raimondas	Komisijos narys / Committee Member
Baranauskas, Algirdas	Komisijos narys / Committee Member
Majienė, Daiva	Komisijos narys / Committee Member
Rodovičius, Hiliaras	Komisijos narys / Committee Member
Dagilytė, Audronė	Komisijos narys / Committee Member
Savickienė, Nijolė	Komisijos narys / Committee Member
Trumbeckaitė, Sonata	Komisijos narys / Committee Member
Inkėnienė, Asta Marija	Komisijos narys / Committee Member
Žilius, Modestas	Komisijos narys / Committee Member
Minkutė, Rima	Komisijos narys / Committee Member
Vitkevičius, Konradas	Komisijos narys / Committee Member
Ževžikovas, Andrejus	Komisijos narys / Committee Member
Nenortienė, Palma	Komisijos narys / Committee Member
Ivanauskas, Liudas	Komisijos narys / Committee Member
Mačiulaitis, Romaldas	Komisijos narys / Committee Member
Gumbrevičius, Gintautas	Komisijos narys / Committee Member
Degutytė, Rimgailė	Komisijos narys / Committee Member
Pečiūra, Rimantas	Komisijos narys / Committee Member
Akramas, Laimis	Komisijos narys / Committee Member
Pukelevičienė, Vilma	Komisijos narys / Committee Member

Extent

62 p.

Thesis Defence Date

2018

Keywords (lt)

Diazepamas

Metabolitai

Bioanalizė

Dujų chromatografija

Masių spektrometrija

Diazepam

Metabolites

Bioanalysis

Gas chromatography

Mass spectrometry

Abstract (lt)

Darbo tikslas: Palyginti instrumentinės analizės metodus (dujų chromatografija-masių spektrometrija) su skirtinga jonizacija (elektroninė jonizacija ir neigiamo jono cheminė jonizacija) nustatinėjant diazepamą ir jo metabolitus šlapimo mėginiuose ir įvertinti jonizacijos tipo įtaką bioanalizės rezultatams. Darbo uždaviniai:

Atlikti mėginių paruošimą taikant fermentinę hidrolizę, skystis-skystis ekstrakciją bei derivatizaciją
Atlikti diazepamo ir jo metabolitų bioanalizę taikant dujų chromatografiją-masių spektrometriją su neigiamo jono chemine jonizacija (GC-NICI-MS)
Atlikti diazepamo ir jo metabolitų bioanalizę taikant dujų chromatografiją-masių spektrometriją su elektronine jonizacija (GC-EI-MS)
Įvertinti jonizacijos tipo įtaką bioanalizės specifiškumui, glaudumui, tiesiškumui, aptikimo ir kiekybinio nustatymo riboms, teisingumui, matricos efektams. Tyrimo objektas ir metodai: žmonių šlapimas su pridėtais etaloniniais vaistų standartais. Taikyta skystis-skystis ekstrakcija, paskui mėginiai derivatizuoti naudojant MTBSTFA derivatizatorių. GC-NICI-MS analizė atlikta su AGILENT TECHNOLOGIES-7890A dujų chromatografu, prie kurio prijungtas 5975C NCI-MS detektorius, dujinis reagentas – metanas NICI režime. GC-EI-MS analizė atlikta su SHIMADZU GCMS-QP2010. Abiem atvejais analizės metu taikytas selektyvaus jono monitoringo (SIM) režimas, o dujinis nešiklis – helis. Rezultatai ir išvados: Bendras chromatografinės analizės laikas buvo 4.9 min., taikant GC-NICI-MS ir 17 min., taikant GC-EI-MS. Analizė atlikta su neigiamo jono chemine jonizacija buvo ženkliai jautresnė ir greitesnė nei taikant elektroninę jonizaciją.

Abstract (en)

Aim: To make the comparative Gas chromatography-Mass spectrometry (GC-MS) bioanalysis of classical benzodiazepine – diazepam, and its metabolites using electron impact (EI) and negative ion chemical ionization (NICI) and to evaluate the impact of ionization type on the analysis. Objectives:

To prepare samples using enzymatic hydrolysis, liquid-liquid extraction and derivatization
To do bioanalysis of diazepam and its metabolites using gas chromatography-mass spectrometry with negative ion chemical ionization (GC-NICI-MS)
To do bioanalysis of diazepam and its metabolites using gas chromatography-mass spectrometry with electron impact ionization (GC-EI-MS)
To evaluate the impact of ionization type on the specificity, precision, linearity, limit of detection, limit of quantification, accuracy and matrix effects of bioanalysis Objects and methods: Subject of study - the drug-free human urine and blood spiked with stock standards of drugs. The concentration of internal standards oxazepam-D5, diazepam-D5, and clonazepam-D4 for these studies was 200 ng/ml. Enzymatic hydrolysis was done with β-glucuronidase from Escherichia Coli (E.Coli). Afterwards, liquid-liquid extraction and derivatization with MTBSTFA were performed. GC-NICI-MS analysis was carried out with an AGILENT TECHNOLOGIES-7890A gas chromatograph coupled to a detector 5975C NCI-MS. The chromatographic separation was performed using DB-5-HT capillary column (30 m x 0.320 mm I.D., 0.10 μm film thickness), methane was used as reagent gas in NICI mode. GC-EI-MS analysis was carried out with SHIMADZU GCMS-QP2010 Ultra with Rxi-5ms capillary column (30 m x 0.25 mm I.D., 0.25 μm film thickness). All quantitative analyses were performed in the selected ion monitoring (SIM) mode, and helium was used as the carrier gas. Results and conclusions: Total chromatographic analysis time was 4.9 min. in GC-NICI-MS and 17 min. in GC-EI-MS analysis and was more sensitive than GC-EI-MS.