Žvalgomieji erkinio encefalito viruso tyrimai šunų kraujo prisisiurbusiose ir laisvai ant šunų ropojančiose erkėse
Recenzentas / Reviewer | |
Svaldenienė, Eglė | Komisijos pirmininkas / Committee Chairman |
Komisijos sekretorius / Committee Secretary | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member |
Dažnu atveju laisvai ropojančiose erkėse erkinio encefalito virusas (EEV), kuris yra zoonotinis patogenas, tiesioginiais molekuliniais tyrimo metodais nenustatomas arba titras ir erkių užkrėstumas labai mažas. Tačiau mokslininkų nustatyta, jog pasimaitinusioje – prisisiurbusioje kraujo erkėje – viruso koncentracija padidėja kelis šimtus kartų. Tai pirmas tokio pobūdžio kryptingai atliktas žvalgomasis tyrimas Lietuvoje, kurio metu erkinio encefalito viruso atžvilgiu tirtos nuo šunų surinktos, laisvai ropojančios erkės (n=160) ir šunų kraujo prisisiurbusios erkės (n=90). Pagrindinis šio darbo tikslas buvo išsiaiškinti šių tiriamųjų erkių grupių užkrėstumą erkinio encefalito virusu ir įvertinti EEV gyvybingumą bei replikacijos galimybes pelių neuroblastomos persėjamoje ląstelių kultūroje (Neuro–2a). Tyrimo metu virusinės RNR nustatymui naudota lizdinė AT-PGR, o rezultatai vertinti elektroforezės gelyje. Laisvai ropojančių erkių suspensijose nustatytas bendras minimalus užkrėtimo dažnis (MIR) 8,75 proc. (95 proc. PI 4,37–13,13), o šunų kraujo prisisiurbusių erkių – 37,78 proc. (95 proc. PI 27,76–47,79). Patvirtinta, jog erkinio encefalito virusas gali būti sėkmingai izoliuotas Neuro–2a ląstelių kultūroje, nesukeldamas citopatinio efekto. Po dviejų mėginių kultivavimo etapų ląstelių kultūroje teigiamų erkinio encefalito viruso atžvilgiu mėginių kiekis reikšmingai padidėjo tik kraujo prisisiurbusių erkių tiriamoje grupėje (p<0,001). Laisvai ropojančių erkių tiriamoje grupėje teigiamų mėginių EEV atžvilgiu kiekis tendencingai mažėjo ir po trečiojo kultivavimo MIR nustatytas 2,5 proc. (p<0,001). Iš dalies, šunų kraujo prisisiurbusių, erkių mėginių, kurie pirminėse suspensijose buvo nustatyti neigiami EEV atžvilgiu, jau po pirmojo kultivavimo 30/56 (53,57 proc.) (p>0,05), o po antrojo net 40/56 (71,43 proc.) mėginių nustatyti teigiami EEV atžvilgiu (p<0,001).
In most cases tick-borne encephalitis virus (TBEV), which is zoonotic pathogen, remains undetected in questing ticks using direct molecular methods or minimum infectious rate is minor. On the other hand, scientists have discovered that virus titer increases hundreds of times in engorged ticks. It is first of a kind purposeful pilot study in Lithuania in which questing ticks (n= 160) and engorged ticks from dogs (n= 90) were investigated for tick-borne encephalitis virus. The main aim of this study was to find out the infectious tick-borne encephalitis virus rate in these testing ticks’ groups and to evaluate TBEV vitality and ability to replicate in mouse neuroblastoma (Neuro–2a) permanent cell culture. Nested RT-PCR was used for RNA detection in samples and results were evaluated in electrophoresis gel. TBEV was detected in 14 out of 20 questing ticks’ pools from dogs (MIR 8.75 % (95 % CI 4.37– 13.13)). 37.78 % (95 % CI 27.76–47.79) of engorged ticks’ samples were positive for TBEV-RNA at first. Also, it was confirmed that tick-borne encephalitis virus can successfully isolate and replicate in Neuro–2a permanent cells. In addition, cytopathic effect was not detected in any samples. Number of positive TBEV-RNA samples increased statistically significant only in engorged ticks’ group after two serial cell line passages (p<0,001). On the contrary, number of positive samples decreased gradually in questing ticks’ group and after the third passage MIR was 2.5 % (p<0,001). TBEV was not detected in part of initial engorged ticks’ samples using nested RT-PCR but 30/56 (53.57%) of samples after the first passage (p>0,05) and 40/56 (71.43 %) after the second passage confirmed positive for TBEV-RNA (p<0,001).