Propofolio poveikis kraujagyslių koneksino-37 puskanalių biofizikinėms savybėms
Recenzentas / Reviewer |
Darbo tikslas. Įvertinti propofolio poveikį kraujagyslių koneksino-37 puskanalių biofizikinėms savybėms. Darbo uždaviniai:
- Įvertinti propofolio poveikį viduląstelinio Ca2+ koncentracijos pokyčiams.
- Ištirti koneksino-37 puskanalių laidumo priklausomybę nuo propofolio koncentracijos.
- Ištirti propofolio poveikį koneksino-37 puskanalių laidumo priklausomybei nuo įtampos. Tyrimo objektas ir metodai. Eksperimentai buvo atlikti naudojant HeLa ląstelių liniją, pasižyminčią stabilia koneksino-37 raiška. Propofolio poveikis viduląstelinio Ca2+ koncentracijos pokyčiams buvo vertinamas taikant fluorescencijos intensyvumo matavimus, naudojant Ca2+ ląstelės viduje surišantį fluorescencinį dažą Fluo-4. Siekiant ištirti biofizikines koneksino-37 formuojamų puskanalių savybes, buvo naudojamas fiksuotos įtampos metodas (angl. patch-clamp), kuris pagrįstas tiesioginiu elektrinių signalų matavimu ląstelėje. Tyrimo rezultatai. Šiame darbe atlikti viduląstelinės Ca²⁺ koncentracijos [Ca²⁺]i matavimo tyrimai atskleidė, kad propofolis priklausomai nuo koncentracijos didina [Ca²⁺]i laukinio tipo (WT) HeLa ląstelėse nepasižyminčiose Cx37 raiška. Propofolio koncentracijos, kurios yra mažesnės nei 35 µM, [Ca²⁺]i reikšmingai nedidina, tačiau reikšmingas [Ca²⁺]i padidėjimas pastebėtas naudojant 60 µM ir didesnes propofolio koncentracijas. [Ca²⁺]i nepriklausė nuo propofolio poveikio laiko HeLa WT ląstelėms. Elektrofiziologiniai tyrimai parodė, propofolio slopinamąjį poveikį Cx37 puskanalių laidumui. Mūsų rezultatai rodo, kad didinant propofolio koncentraciją, Cx37 puskanalių laidumas mažėja. Tuo tarpu tiriant laidumo priklausomybę nuo įtampos, įtakos turėjo tik 5 µM propofolio koncentracija, kuri pasižymi nedideliu slopinamuoju poveikiu Cx37 puskanalių laidumui, tačiau 90 µM propofolio koncentracija, kuri Cx37 puskanalių laidumą slopino ~4 kartus daugiau, jų laidumo priklausomybės nuo įtampos nepaveikė.
Aim: To evaluate the effect of propofol on the biophysical properties of vascular connexin-37- hemichannels. Research objectives: 1. To examine the effect of propofol on intracellular Ca²⁺ concentration changes. 2. To investigate the concentration-dependent effects of propofol on Cx37 hemichannel conductance. 3. To determine the effect of propofol on the voltage-dependence of connexin-37 hemichannel conductance. Object and methods. Experiments were conducted using a HeLa cell line with stable Cx37 expression. Changes in intracellular Ca²⁺ concentration were measured using Fluo-4, a Ca²⁺-sensitive fluorescent dye. The biophysical properties of Cx37 hemichannels were studied using the patch-clamp technique, which enables direct measurement of electrical signals in the cell. Results Measurements of intracellular Ca²⁺ concentration ([Ca²⁺]i) showed that propofol increases [Ca²⁺]i in wild-type (WT) HeLa cells lacking Cx37 expression, in a concentration-dependent manner. Concentrations below 35 µM did not significantly elevate [Ca²⁺]i while significant increases were observed at 60 µM and higher. The duration of propofol exposure did not affect [Ca²⁺]i levels in WT cells. Electrophysiological analyses revealed that propofol exerts an inhibitory effect on Cx37 hemichannel conductance. Conductance decreased with increasing propofol concentration. Notably, only the 5 µM concentration modestly affected the voltage-dependence of Cx37 conductance, while a 90 µM concentration, which inhibited conductance approximately four-fold, did not alter its voltage-dependence.