Erkinio encefalito viruso molekulinė diagnostika ožkų piene
Recenzentas / Reviewer | |
Komisijos sekretorius / Committee Secretary | |
Komisijos pirmininkas / Committee Chairman | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member |
Erkinio encefalito virusas (EEV) yra ypač auganti grėsmė, nes susirgimų erkiniu encefalitu daugėja ir šis virusas geografiškai greitai plinta. Didelis pavojus užsikrėsti EE žmonėms yra vartojant užkrėstą nepasterizuotą ožkų pieną ir jo produktus. EE liga sukelia neurologinius sutrikimus, kurie gali išlikti visą likusį žmogaus gyvenimą. Svarbu paminėti tai, jog šis virusas yra zoonotinis, tačiau klinikiniai požymiai gali pasireikšti tik kai kurioms gyvūnų rūšims. Ši sritis Lietuvoje dar nebuvo tyrinėta, todėl buvo labai svarbu atlikti žvalgomuosius EEV paplitimo tyrimus ožkų piene. Šio darbo tikslas – molekuliniais metodais įvertinti žmonėms pavojingo erkinio encefalito viruso žvalgomąją epidemiologinę situaciją Lietuvoje laikomų ožkų piene. Iš viso buvo surinkti ir molekuliniais tyrimais ištirti 283 ožkų pieno mėginiai. Šio tyrimo objektai - 8 privatūs ožkų ūkiai, kurie pasiskirstę po visą Lietuvą. Mėginiai rinkti nuo birželio iki spalio mėnesio, ganykliniu laikotarpiu, laktacijos periodu. Tyrimams naudoti bendri jungtiniai (iš bendros pieno talpos) ožkų pieno mėginiai, kurie buvo imti periodiškai kas keturias dienas iš kiekvieno ūkio. Taikant konvensinės ir realaus laiko TaqMan polimerazinės grandininės reakcijos metodus bei skirtingus oligonukleotidinius pradmenis (NS3, NS5, NCR5) ištirti ožkų pieno mėginiai bei gauti preliminarūs rezultatai. Teigiamų RNR viruso mėginių nustatyta 15 (5,3 proc. [CI% 3,00-8,59]), rezultatai gauti panaudojus NS5, NCR5 oligonukleotidinius pradmenis. Atlikus tyrimus su NS3 oligonukleodiniais pradmenimis įvertinta, kad diagnostikoje šie pradmenys netinka (p<0,001). Ištyrus jungtinius ožkų pieno mėginius nustatyta koreliacija tarp teigiamų mėginių skaičiaus ir ūkio dydžio. Mažesniuose ūkiuose statistiškai nustatyta daugiau teigiamų erkinio encefalito viruso mėginių, nei dideliuose ūkiuose (p<0,05). Įvertinus teigiamų mėginių pasiskirstymą tarp skirtingų Lietuvos rajonų ir skirtingų laktacijos mėnesių, statistiškai reikšmingų skirtumų nenustatyta.
Tick-borne encephalitis virus (TBEV) is an extremely rising threat because number of cases of tick-born encephalitis is increasing and this virus is spreading fast geographically. For humans, use of unpasteurized goat milk and its products poses a high risk of getting TBE. TBE causes neurological disorders which can remain for the whole lifetime. It is important to mention that this virus is zoonotic but clinical symptoms can manifest only in some animal species. In Lithuania, this field has not been researched previously, therefore it was very important to carry out an exploratory research of TBEV prevalence in goat milk. The purpose of this thesis is to evaluate the exploratory epidemiological situation of human-harming tick-borne encephalitis virus in Lithuanian goat milk using molecular diagnostic methods. In total, 283 samples of goat milk were collected and examined using molecular diagnostic methods. The objects of this research - 8 private goat farms which are distributed throughout Lithuania. Samples were collected during months since June till October (during grazing period). Conjoined (milk from general tank) samples of goat milk, which were collected every 4 days from each farm, were used for diagnostics. By applying both conventional and real-time TaqMan polymerase chain reaction methods and using different oligonucleotide primers (NS3, NS5, NCR5) all samples of goat milk were examined and preliminary results received. 15 samples were identified positive for RNA of the virus. (5,3 pct. [CI% 3,00-8,59]). Results were received using NS5, NCR5 oligonucleotide primers. After carrying out tests using NS3 oligonucleotide primers it was estimated that these primers are inexpedient in diagnostics of the virus (p<0,001). After the examination of the conjoined goat milk samples, a correlation between number of positive samples and the size of the farm was elucidated. It was statistically identified that there were more TBEV-positive samples in smaller farms than in the bigger farms (p<0,05). By evaluating distribution of positive samples between different regions of Lithuania and different periods of lactation, no statistically significant differences were found.