Pažangios terapijos eksperimentinio preparato kūrimas: žiurkės raumeninės kilmės kamieninių ląstelių izoliavimas ir charakterizavimas

Abstract

Raumeninės kilmės kamieninės ląstelės (angl. MDSC) turi daug privalumų, lyginant su kitomis suaugusio organizmo kamieninėmis ląstelėmis ir gali būti plačiai taikomos regeneracinėje medicinoje. Kuriant eksperimentinius preparatus šių ląstelių pagrindu, būtina atlikti išsamų kultūros charakterizavimą. Tikslas Išskirti, kultivuoti ir išsamiai charakterizuoti raumeninės kilmės kamieninių ląstelių kultūrą, kaip pažangios terapijos eksperimentinį preparatą. Metodika MDSC išskirtos iš 2-3 sav. Wistar linijos žiurkės patinėlio raumens bioptato, naudojant anksčiau publikuotą metodiką. Tirtas ląstelių gyvybingumas po krio-šaldymo. MDSC multipotentiškumo tyrimai atlikti taikant adipogeninę, chondrogeninę ir osteogeninę diferenciaciją. MDSC charakterizavimas atliktas tėkmės citometrijos (žymenys: CD45, CD59, CD90 ir c-kit) bei realaus laiko polimerazės grandininės reakcijos (SOX2, OCT4, Nanog) metodais. Rezultatai MDSC išskyrimas kartotas 3 kartus, statistiškai reikšmingų skirtumų lyginant visas kultūrų savybes nenustatyta (p<0,05). Morfologiškai ląstelės yra apvalios, verpstės arba trikampio formos. Atlikus krio-šaldymą (po 1X106 ląstelių 1 ml šaldymo terpės) ir atšildžius ląstelių kultūras po 30, 60 ir 90 d. ląstelių gyvybingumas nekito. Apie 90 proc. ląstelių išliko gyvybingos po atšildymo ir pasižymėjo dideliu proliferacijos potencialu. Adipogeninė, chondrogeninė ir osteogeninė diferenciacijos buvo teigiamos. Adipogeninė diferenciacija patvirtinta Oil red O dažymu, chondrogeninė – Alcian blue dažymu, osteogeninė – von Kossa dažymu. Atlikus tėkmės citometriją nustatyta, kad MDSC pasižymėjo CD59, CD90 ir c-kit žymenų raiška, CD45 raiška buvo neigiama. Atlikus realaus laiko PGR nustatyta teigiama SOX2, OCT4 ir Nanog genų ekspresija. Išvados 1. MDSC pasižymi dideliu proliferacijos potencialu, kuris nekinta po krio-[...].