Options
Lektinų, išskirtų iš Phaseolus vulgaris L., antioksidacinio/prooksidacinio aktyvumo tyrimas ir įtakos glioblastomos ląstelių gyvybingumui įvertinimas
Vaidelis, Šarūnas |
Savickas, Arūnas |
Inkėnienė, Asta Marija | Recenzentas / Reviewer |
Savickienė, Nijolė | Komisijos pirmininkas / Committee Chairman |
Majienė, Daiva | Komisijos narys / Committee Member |
Balanaškienė, Rima | Komisijos narys / Committee Member |
Marcinkevičienė, Rasa | Komisijos narys / Committee Member |
Švarcaitė, Jūratė | Komisijos narys / Committee Member |
Budrikienė, Aušra | Komisijos narys / Committee Member |
Jakubauskas, Mindaugas | Komisijos narys / Committee Member |
Zulanienė, Eglė Audronė | Komisijos narys / Committee Member |
Kuncaitė, Giedrė | Komisijos narys / Committee Member |
Martinėnas, Žydrūnas | Komisijos narys / Committee Member |
Maruška, Audrius | Komisijos narys / Committee Member |
Ragažinskienė, Ona | Komisijos narys / Committee Member |
Gumbrevičius, Gintautas | Komisijos narys / Committee Member |
Skyrius, Vaidas | Komisijos narys / Committee Member |
Radžiūnas, Raimondas | Komisijos narys / Committee Member |
Kalvėnienė, Zenona | Komisijos narys / Committee Member |
Drakšienė, Gailutė | Komisijos narys / Committee Member |
Brusokas, Valdemaras | Komisijos narys / Committee Member |
Marksienė, Rūta | Komisijos narys / Committee Member |
Ževžikovas, Andrejus | Komisijos narys / Committee Member |
Vitkevičius, Konradas | Komisijos narys / Committee Member |
Ivanauskas, Liudas | Komisijos narys / Committee Member |
Ramanauskienė, Kristina | Komisijos narys / Committee Member |
Briedis, Vitalis | Komisijos narys / Committee Member |
Janulis, Valdimaras | Komisijos narys / Committee Member |
Jakštas, Valdas | Komisijos narys / Committee Member |
Barsteigienė, Zita | Komisijos narys / Committee Member |
Tyrimo metodai: Ląstelių sėjimo metodika; ląstelių tankio nustatymas; ląstelių gyvybingumo nustatymas MTT testu; neuronų žūties įvertinimas fluorescencinės mikroskopijos metodu; viduląstelinių RS kiekio įvertinimas; ekstraląstelinių RS kiekio įvertinimas; statistinė analizė. Tyrimo tikslas: Ištirti įvairių koncentracijų lektinų, išskirtų iš Phaseolus vulgaris L., antioksidacinį/ prooksidacinį poveikį ir įtaką C6 ląstelių gyvybingumui. Tyrimo uždaviniai:
- Atlikti literatūros duomenų analizę apie lektinų, išskirtų iš Phaseolus vulgaris L., biologinį poveikį; 2. Nustatyti įvairių koncentracijų lektinų, išskirtų iš Phaseolus vulgaris L., antioksidacinį/prooksidacinį aktyvumą;
- Nustatyti įvairių koncentracijų lektinų poveikį C6 ląstelių kultūros gyvybingumui.
Tyrimų rezultatai:
- Buvo matuojami vandenilio peroksido pokyčiai esant 1 - 10 µg lektino koncentracijoms ir nustatyta, kad skirtingų koncentracijų lektinas neveikia neutralizuojančiai vandenilio peroksido kiekio.
- Atlikti vandenilio peroksido matavimai DMEM terpėje su 1 - 10 µg lektino koncentracijoms parodė, kad lektinas, priklausomai nuo jo koncentracijos, negeneruoja laisvųjų radikalų.
- Buvo matuojamas glioblastomos C6 ląstelių gyvybingumas su MTT po 24 valandų ir nustatyta, kad didėjant lektino koncentracijai ląstelių gyvybingumas sparčiai mažėjo: 5 µg koncentracijos lektinas gyvybingumą sumažino beveik 2 kartus (iki 57,2111.16%), o 10 µg koncentracijos lektinas ląstelių gyvybingumą sumažino beveik 13 kartų (iki 7,571.25%).
- Tiriant viduląstelinių RS generaciją C6 ląstelėse, paveikus jas 1 - 10 µg koncentracijos lektinu, buvo nustatyta, kad didėjant lektino koncentracijai, viduląstelinių laisvųjų radikalų kiekis taip pat didėja.
- Fluorescencinės mikroskopijos metodu buvo nustatyta, kad lektinai sukelia glioblastomos ląstelių apoptozę ir nekrozę. Išvados:
- Lektinas, išskirtas iš Phaseolus vulgaris L, naudotas įvairiomis (1 - 10 µg) koncentracijomis, nekeitė vandenilio peroksido koncentracijos ląstelių augimo terpėje. Taigi jis nepasižymi vandenilio peroksidą neutralizuojančiu ir jo generaciją skatinančiu poveikiu.
- Viduląstelinių laisvųjų radikalų gamyba C6 ląstelėse, paveikus jas skirtingų (1 - 10 µg) koncentracijų lektinu, padidėjo statistiškai reikšmingai (apie 1,3 karto). Taigi lektinai, priklausomai nuo koncentracijos, skatina viduląstelinių radikalų generaciją glioblastomos C6 ląstelėse.
- C6 ląstelių kultūros gyvybingumas, paveikus ją 1 - 10 µg koncentracijos Phaseolus vulgaris L. lektinu po 24 h, sumažėjo nuo 7 iki 93 procentų. Taigi lektinai, priklausomai nuo koncentracijos, mažina glioblastomos C6 ląstelių gyvybingumą.
Methods: The cell cultivation method; measurement of cell density; determination of cell viability with MTT assay; assessment of neuronal death with fluorescent microscopy; measurement of intracellular RS; measurement of extracellular RS; statistical analysis. The aim of research: To investigate antioxidative/prooxidative effects of different concentrations of the lectin, isolated from Phaseolus vulgaris L., and influence on the viability of the C6 cells. Goals of the study:
- To perform an analysis of the literature on the biological effects of lectin, isolated from Phaseolus vulgaris L.;
- To determine antioxidative/prooxidative activity of different concentrations of the lectin, isolated from Phaseolus vulgaris L.;
- To determine effect on viability of the C6 cell culture using different concentrations.
Results:
- Concentrations of hydrogen peroxide were measured with 1 - 10 µg concentrations of lectin and it was found, that different concentrations of lectin did not neutralize hydrogen peroxide.
- Measurements of hydrogen peroxide in DMEM medium with 1-10 mg concentrations of lectin showed, that the lectin, depending on it's concentration, did not generate free radicals.
- Viability of cells was measured in C6 glioblastoma cells with MTT after 24 hours and it was found, that when concentration of lectin increased, viability of cells rapidly decreased: 5 µg concentration of lectin reduced the viability of almost 2 times ( up to 57.21% ± 11.16% ) and at 10 µg concentration of lectin viability of cells decreased almost 13 times (up to 7.57% ± 1.25% ) .
- Study of intracellular RS generation in C6 cells, after exposure with 1 - 10 µg concentrations of lectin showed, that, when concentration of lectin increased, the concentration of intracellular RS also increased.
- Fluorescence microscopy showed that lectins can induce apoptosis and necrosis in glioblastoma cells. Conclusions:
- Lectin, isolated from Phaseolus vulgaris L, that was used in various (1 - 10 µg) concentrations did not change the concentration of hydrogen peroxide in medium of the cell culture. So lectin neither has a hydrogen peroxide generation neutralizing nor stimulating effects.
- Production of intracellular free radicals in C6 cells, after exposure with different (1 - 10 µg) concentrations of lectin, significantly increased (about 1,3 times). Thus, lectin, depending on its concentration, stimulates generation of intracellular free radicals in C6 glioblastoma cells.
- Viability of C6 cell culture, after exposure with 1 - 10 µg concentrations of Phaseolus vulgaris L. lectin, after 24 h decreased from 7 to 93 percent. Thus, lectin, depending on its concentration, reduces viability of C6 glioblastoma cells.