U-87 glioblastomos ląstelių suformuotų navikų ir natrio valproato poveikio angiogenezei tyrimas viščiuko embriono chorioalantojinėje membranoje
Recenzentas / Reviewer | |
Recenzentas / Reviewer | |
Eidukaitė, Audronė | Komisijos pirmininkas / Committee Chairman |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member |
Šiame darbe buvo tirtas natrio valproato poveikis U-87 glioblastomos ląstelių sukeltai angiogenezei, panaudojant viščiuko embriono chorioalantojinės membranos modelį. Eksperimentiniame darbe buvo naudojami apvaisinti Cobb-500 veislės vištų kiaušiniai. 7-tą inkubacijos parą šalia stambiausios kraujagyslės buvo uždedama absorbuojanti kempinėlė su paruoštomis U-87 ląstelėmis. Norint įvertinti U-87 glioblastomos ląstelių sukeltą neoangiogenezę ir suformuoto naviko vaskuliarizaciją 9-12 paromis atlikta biomikroskopija in vivo. Parodyta, kad U-87 glioblastomos ląstelių linijos suformuoti navikai sukėlė ryškią neoangiogenezę viščiuko embriono chorioalantojinėje membranoje, o ląstelės, kurios buvo paveiktos 8 mM natrio valproato tirpalu neoangiogenezės nesukėlė. Inkubacija atliekama iki 12-tos viščiuko embriono vystymosi paros. Histomorfometriniu metodu atlikti kraujagyslių skaičiaus, jų ploto ir chorioalantojinės membranos ploto matavimai. Nustatyta, kad U-87 glioblastomos ląstelių suformuotų navikų poveikyje sustorėjo chorioalantojinė membrana, padidėjo kraujagyslių skaičius ir jų plotas palyginus su kontrole. Paveikus U-87 ląsteles 4 mM ir 8 mM natrio valproato tirpalu, patikimai sumažėjo kraujagyslių skaičius ir jų plotas. 8 mM natrio valproato grupėje chorioalantojinės membranos plotas beveik susilygino su kontroline grupe. Atlikus imunohistocheminę analizę su kraujagyslių endotelio augimo veiksnio antikūnu parodyta, kad ląsteles paveikus 4 mM natrio valproato tirpalu, navikinių ląstelių išskiriamo kraujagyslių endotelio augimo veiksnio raiška sumažėjo, o ląsteles paveikus 8 mM natrio valproato tirpalu raiškos visai nebuvo. Taip pat nustatyta, kad ląstelių su teigiama proliferuojančių ląstelių branduolio antigeno raiška skaičius teigiamai koreliavo su kraujagyslių plotu bei kraujagyslių skaičiumi.
The impact of sodium valproate on angiogenesis, caused by U-87 glioblastoma cells, was examined in this research using chick embryo chorioallantoic membrane model. Fertilized Cobb-500 chicken eggs were used in the experiment. On the 7th day of incubation, an absorbent sponge with prepared U-87 cells was placed near the largest blood vessel. In order to evaluate neoangiogenetic and tumor vascularisation, caused by U-87 glioblastoma cells, a biomicroscopy in vivo was performed on the 9-12th day. It was observed, that tumors from U-87 glioblastoma cells, caused evident neoangiogenesis in chick embryo chorioallantoic membrane, whereas cells, which were treated with 8mM sodium valproate solution, did not cause neoangiogenesis. Incubation was performed up to the 12th day of chick embryo development. Vascular count, surface area and chorioallantoic membrane area measurements were performed using the histomorphometric method. It was determined that tumors caused an increase in chorioallantoic membrane thickness, vascular count and their surface area, compared to control. Treating U-87 cells with 4 mM and 8 mM sodium valproate solution effectively caused a decrease in vascular count and their surface area. Chorioallantoic membrane surface area almost equalized with control group in the 8 mM sodium valproate set. After immunohistochemical analysis with vascular endothelial growth factor antibody, it was determined that treating cells with 4 mM sodium valproate solution causes a decrease in tumor cell-derived vascular endothelial growth factor expression, whereas after treating cells with 8 mM sodium valproate solution this factor was not expressed. It was also found that cell count, which have positive proliferating cell nuclear antigen expression, positively correlates with vascular area and vascular number.