Nikotino ir kotinino nustatymas rūkančiųjų seilėse chromatografiniais metodais

Abstract

Darbo tikslas: Atlikti kokybinę ir kiekybinę nikotino ir kotinino analizę rūkančiųjų seilėse plonasluoksnės ir dujų chromatografijos – masių spektrometrijos metodais. Darbo uždaviniai: 1. Nustatyti tinkamiausią metodą nikotino ir kotinino išskyrimui iš seilių. 2. Atlikti nikotino ir kotinino kokybinę ir kiekybinę analizę seilių mėginiuose efektyviosios plonasluoksnės chromatografijos ir dujų chromatografijos metodais. 3. Parinkti tinkamiausią tirpiklių sistemą ir ryškinimo būdą efektyviosios plonasluoksnės chromatografijos metodui. 4. Įvertinti, ar seilėse aptinkamo nikotino ir kotinino chromatografinė analizė yra patikimas būdas atskirti rūkančiuosius nuo nerūkančiųjų. Tyrimo objektas: rūkančiųjų ir nerūkančiųjų suaugusių žmonių seilės ir cigaretės. Metodai: skystis – skystis ekstrakcija, efektyvioji plonasluoksnė chromatografija, dujų chromatografija – masių spektrometrija. Rezultatai ir išvados: Atlikus ekstrakcijas seilių mėginiuose nustatyta, kad tinkamiausias ekstrahentas yra dichlormetanas bei prieš atliekant seilių ekstrakciją būtinas žmogaus seilių centrifugavimas. Vertinant nikotiną ir kotininą efektyviosios plonasluoksnės chromatografijos metodu, buvo pasirinkta tinkamiausia tirpiklių sistema, susidedanti iš etilacetato, metanolio ir amoniako tirpalo (85:10:5, v/v). Dėmės ryškinamos UV šviesoje. Vykdant efektyviąją plonasluoksnę chromatografiją nikotinas ir kotininas seilėse nebuvo identifikuotas, nes metodas pasižymi mažesniu jautrumu lyginant su dujų chromatografijos – masių spektrometrijos metodu. Tačiau metodas buvo pritaikytas kokybiškai ir kiekybiškai įvertinti nikotiną tabake. Vienoje cigaretėje buvo nustatyta vidutiniškai 13,3 ± 0,41 mg nikotino. Atlikus kiekybinę nikotino ir kotinino analizę iš seilių mėginių dujų chromatografijos – masių spektrometrijos metodu nustatyta, kad nikotino didžiausia koncentracija nustatoma popietinėje paros dalyje (15 val.), o kotinino – vakarinėje paros dalyje (21 val.). Dujų chromatografijos – masių spektrometrijos metodas tinka nustatyti itin mažas nikotino ir kotinino koncentracijas žmogaus seilėse. Dėl to šiuo metodu įmanoma nustatyti, ar tiriamasis asmuo yra rūkantis. Tačiau dėl rezultatų tikslumo būtina įvertinti abu biožymenis (nikotiną ir kotininą).