ANG II moduliuoja nuo hipoksijos priklausomą žmogaus kelio sąnario kremzlės kaulėjimą

Abstract

Įvadas: Arterinė hipertenzija (AH) – pagrindinis širdies-kraujagyslių sistemos ligų vystymąsi lemiantis veiksnys [1]. AH korekcijai naudojami angiotenzino II (AngII) 1 tipo receptoriaus antagonistai, kurie mažina kraujagyslės tonusą ir normalizuoja kraujospūdį [2]. Žinoma, kad šie antagonistai skatina chondrocitų diferencijavimą į kaulinį audinį [3]. Tačiau nėra aišku, ar kremzlės kaulėjimas pasireiškia dėl hipoksinių sąlygų sumažėjimo, slopinant Ang II 1 tipo receptorių. Hipoksinės sąlygos svarbios chondrocitų augimui – užtikrina sveikos kremzlės struktūrą [4]. Tyrimo tikslas: Ištirti Ang II 1 tipo receptoriaus antagonisto poveikį kremzlės hipertrofijai, auginant žmogaus kelio sąnario chondrocitų monosluoknį hipoksinėmis sąlygomis. Tyrimo metodai: Tyrimo metu naudotas CoCl2 sukelti hipoksijai ir losartanas – Ang II 1 tipo receptoriaus antagonistas. Išsiaiškintos veiksmingas CoCl2 ir losartano koncentracijas, kurios buvo naudojamos tolimesniuose eksperimentuose. Išskirti žmogaus kelio sąnario kremzlės chondrocitai išsodinti 5000 ląst./mL tankiu, 96 šulinėlių ląstelių kultivavimui tinkamoje plokštelėje. Ląstelės suskirstytos į grupes (n = 4), kurios veiktos 10-4 - 10-12 M CoCl2 tirpalais. Po 10 dienų kultivavimo (37 oC, 5% CO2) vertintas ląstelių gyvybingumas, dažant 0,4% tripano mėlio tirpalu. Analogiškai įvertinta losartano įtaka kremzlės ląstelių gyvybingumui. Sekančiame etape naudoti 10-4, 10-6, 10-9 M CoCl2 ir 10-7 M losartano tirpalai. Chondrocitai išsodinti 5000 ląst./mL tankiu, suskirstyti į tiriamąsias grupes, veiktas atitinkamos koncentracijos CoCl2 ir veiktas arba neveiktas losartano tirpalais (n = 3). Kas 2 d. nuo ląstelių nurenkamas supernatantas, užšaldomas -80 oC, chondrocitų hipertrofijos žymens - kolageno X (Kol X) - nustatymui po 2, 6, 10 dienų nuo tyrimo pradžios ELISA metodu. Atlikta duomenų analizė taikant Kruskal-Wallis kriterijų. Skirtumas tarp grupių laikytas reikšmingas, jei gauta p reikšmė mažesnė už α = 0,05. […].