Proliferaciją ir invazyvumą slopinantis mažų juglono koncentracijų poveikis glioblastomos C6 ląstelėms

Abstract

Įžanga Glioblastoma multiforme (GBM) yra dažniausiai pasitaikantis ir agresyviausias galvos smegenų navikas. GBM sudaro 20% visų intrakranijinių navikų. Vidutinis išgyvenamumas po diagnozavimo yra 14,6 mėnesio [1]. 5-hidroksi-1,4-naftochinonas (juglonas) yra junginys, gausiai randamas Juglans nigra L. (juodojo riešuto) lapuose, pasižymintis stipriomis priešvėžinėmis savybėmis, patvirtintomis prostatos [2], krūties [2], storosios žarnos [2], skrandžio vėžio, melanomos ir ūminės mieloleukemijos ląstelių kultūrose. Juglono citotoksinis poveikis GBM C6 ląstelėms yra įrodytas, nustatytas EC50 = 10,42 ± 1.59 μmol/L [3]. Tikslas Nustatyti juglono poveikį žiurkės glioblastomos C6 ląstelių proliferacijai ir invazyvumui. Uždaviniai 1. Įvertinti juglono poveikį C6 ląstelių proliferacijos greičiui; 2. Įvertinti juglono poveikį C6 ląstelių kultūros invazyvumui. Metodika Medžiaga. 5-hidroksi-1,4-naftochinonas (juglonas), 97 proc. grynumo (Sigma-Aldrich). Ištirpintas 70 proc. etilo alkoholyje. Ląstelės. Tyrimui buvo naudojama žiurkės galvos smegenų glioblastomos naviko kilmės ląstelių kultūra C6, gauta iš CLS Cell Lines Service GmbH (Vokietija). Ląstelės auginamos Dulbecco modifikuotoje Eagle ląstelių auginimo terpėje, turinčioje 4,5 g/L gliukozės su 100 av/ml penicilino ir 100 μg/ml streptomicino, ir 2 mM L-glutamino, esant 10 proc. veršelių kraujo serumo terpėje. Ląstelės inkubuojamos 37°C temperatūroje, esant 5 proc. CO2 atmosferoje. Ląstelių proliferacijos greičio tyrimas. Vertintas 96 valandų bėgyje, naudojant Hoeschst 33342 ir propidžio jodido dažus. Ląstelių suspensija (tankis 8500 ląst./mL) išsėta į 24 šulinėlių plokšteles. Po 24 val. pridedama juglono iki 1 ir 4 μmol/L koncentracijos ir t=0 val. gyvos, apoptotinės ir nekrotinės ląstelės buvo skaičiuojamos naudojant fluorescencinį mikroskopą. Ląstelės buvo skaičiuojam[...].