IKACh slopiklis 2-[(4-metilfenil)sufonilkarbamido]-1-(4-nitrobenzil) piridinio bromidas (2-AP27) yra muskarino M2 receptorių antagonistas

Abstract

Aminopiridinai yra žinomi acetilcholino aktyvintos kalio srovės (IKACh) slopikliai. Tyrėme, ar 2-aminopiridino sulfonilkarbamidinio darinio 2-AP27 anticholinerginis poveikis varlės miokardo ląstelių izoprenalinu stimuliuotai L-tipo Ca2+ srovei yra sąlygotas šio junginio savybe blokuoti muskarino M2 receptorius. Izoliuotų miokardo ląstelių L-tipo Ca2+ srovę (ICaL) registravome fiksuotos įtampos metodu. β1-β2 – adrenoreceptorių agonistas izoprenalinas (0,1 μM) padidino miokardo ląstelių ICaL iki 475±61 proc. (n=4) (p<0,05) palyginus su kontrole. M2 muskarino receptorių agonistas karbacholis (0,01 μM) sumažino ją iki 42±15 proc. palyginus su ICaL dydžiu veikiant izoprenalinui. 2-aminopiridino darinys 2-AP27 (100 μM) šiomis sąlygomis padidino ICaL iki 95±5,8 proc., t. y. visiškai panaikino slopinamąjį karbacholio poveikį. Kitoje eksperimentų serijoje A1-adenozino receptorių agonistas adenozinas (1 μM) izoprenalinu stimuliuotą ICaL sumažino iki 56±10 proc. (n=3) (p<0,05). Veikiant 2-AP27 (100 μM) junginiui, adenozino sumažinta ICaL išliko beveik nepakitusi ir buvo 51±7,9 proc. (n=3) (p<0,05) palyginus su ICaL dydžiu veikiant izoprenalinui. Šie rezultatai rodo, kad 2-aminopiridino darinys 2-AP27, kurio amino grupė pakeista 4-toluolsulfonilkarbamido fragmentu, ir piridino azotas, kvaternizuotas 4-nitrobenzilo bromidu, yra muskarino M2 receptorių antagonistas. Aminopyridines are known to inhibit acetylcholine-activated K+ current (IKACh) in cardiac myocytes. The aim of this study was to examine the effect of 2-aminopyridine sulfonylcarbamide derivative 2-AP27 on isoprenaline-stimulated L-type Ca2+ current (ICaL) and to identify whether 2-AP27 acts via blocking of muscarinic M2-receptors in frog cardiomyocytes. The whole-cell configuration of the patch-clamp technique was used to record ICaL in enzymatically isolated cardiac myocytes. Isoprenaline (0.1 μM), an agonist of β1-β2-adrenoreceptors, stimulated the ICaL up to 475±61% (n=4) (P<0.05) vs. control. Then, in the first series of experiments, carbachol (0.01 μM), an agonist of M2 muscarinic receptors, reduced the stimulatory effect of isoprenaline to 42±15% vs. isoprenaline alone. 2- AP27 (100 μM) alone completely abolished the inhibitory effect of carbachol on isoprenaline-stimulated ICaL, which recovered to 95±5.8% of the effect of isoprenaline. In the second series of experiments, adenosine (1 μM), an agonist of A1-adenosine receptors, reduced the stimulatory effect of isoprenaline on ICaL to 56±10% (n=3) (P<0.05). Then 2-AP27 (100 μM) applied in the presence of adenosine, had no effect on ICaL, which remained at 51±7.9% (n=3) (P<0.05) of the effect of isoprenaline. These results suggest that 2-AP27, a new derivative of 2-AP, containing 4-toluolsulfonylcarbamide instead of amino group and quaternizated nitrogen by 4-nitrobenzylbromide in pyridine ring, is acting as an antagonist of muscarinic M2 receptors in frog ventricular myocytes.