Fluorescence applications in hormones, drugs and proteins immunoassay

Abstract

Apžvalgoje nagrinėjama viena iš imuninės analizės rūšių, tai fluorescencinė imuninė analizė, kuri yra pakankamai dažnai naudojama hormonų ir kitų biologiškai aktyvių medžiagų kiekybiniam nustatymui. Šiam analizės metodui įgyvendinti būtinas antigenų arba antikūnų žymėjimas fluorescuojančiais junginiais-fluorescencinėmis žymėmis. Žymėms keliami tokie reikalavimai: tirpumas vandenyje, fotostabilumas, didelis fluorescencijos švytėjimo efektyvumas bei žema nespecifinė adsorbcija. Žymės fluorescencijos gyvavimo laikas yra nuo 10 iki 1000 μs, jo reikšmė svarbesnė fluorescencijos poliarizacijos imunoanalizei, bet ypatingai svarbi Time Resolved (TR) fluorescencinei imunoanalizei. Taip pat svarbūs žymės fluorescencijos sužadinimo bangos maksimumas bei emisijos bangos maksimumas, pageidautina, kad jie būtų skirtingi negu natūralių biologinių substancijų. fluorescencijos sužadinimo bangos maksimumas bei emisijos bangos maksimumas. TR fluorescentinei imunoanalizei (TRFIA) tinkamiausi europio ir terbio chelatais žymėti imuninių reakcijų agentai. Pakankamai perspektyvūs žymėjimai junginiais sužadinamais infraraudonojoje spektro dalyje. Fluorescencijos poliarizacijos imuninė analizė (FPIA) kol kas labiau pritaikyta mažos molekulinės masės junginių analizei dėl per trumpo daugumos žymių bei per ilgo fluorescencijos gyvavimo laiko, jei žymė - lantanidas. Tiesioginis fluorescuojančių junginių prijungimas prie reagento dažnai sumažina detekcijos jautrumą, todėl žymint lantanidais chelatų ir kitų tarpinių junginių buvimas yra būtinas. Fluorescuojantys junginiai prijungiami prie antikūnų naudojant įvairias reaktyvias chemines grupes, bet daugiausia amino grupes. Fluorescencinė imuninė analizė gali skirtis tiek fluorescencijos detektavimo, tiek antikūnų imobilizavimo metodais. Nesudarę komplekso su antigenu žymėti antikūnai gali likti sistemoje arba būti iš jos pašalinami. Immunoassays are preferred for quantification of many analytes, especially hormones and other biological active substances. One of the most perspective of immunoassays seems to be non-isotopic, especially fluorescent-labeled applications. Fluorescence immunoassay applications (FIAs) are classified according to the identities and performance characteristics of the probes that are used. Immunoassays in which fluorophore-labeled reagents are used for steady-state intensity measurements may simply use the generic term, FIAs. If a fluorophore property is altered as a result of the immunoreaction, then the assay may be named after the transduction principle, such as quenching or energy transfer immunoassays. Assays are also classified by the technologies used for measurement, as exemplified by polarization, time-resolved, or phase-resolved fluoroimmunoassays (PRFIAs). The distinctions may be blurred when more than one principle or technology is used. In these cases, classification may be rather arbitrary.