KI Tarpląstelinės sąveikos tyrimų laboratorija (10.08.02)

Darbo tikslas. Įvertinti propofolio poveikį kraujagyslių koneksino-37 puskanalių biofizikinėms savybėms. Darbo uždaviniai:

1. Įvertinti propofolio poveikį viduląstelinio Ca2+ koncentracijos pokyčiams.
2. Ištirti koneksino-37 puskanalių laidumo priklausomybę nuo propofolio koncentracijos.
3. Ištirti propofolio poveikį koneksino-37 puskanalių laidumo priklausomybei nuo įtampos. Tyrimo objektas ir metodai. Eksperimentai buvo atlikti naudojant HeLa ląstelių liniją, pasižyminčią stabilia koneksino-37 raiška. Propofolio poveikis viduląstelinio Ca2+ koncentracijos pokyčiams buvo vertinamas taikant fluorescencijos intensyvumo matavimus, naudojant Ca2+ ląstelės viduje surišantį fluorescencinį dažą Fluo-4. Siekiant ištirti biofizikines koneksino-37 formuojamų puskanalių savybes, buvo naudojamas fiksuotos įtampos metodas (angl. patch-clamp), kuris pagrįstas tiesioginiu elektrinių signalų matavimu ląstelėje. Tyrimo rezultatai. Šiame darbe atlikti viduląstelinės Ca²⁺ koncentracijos [Ca²⁺]i matavimo tyrimai atskleidė, kad propofolis priklausomai nuo koncentracijos didina [Ca²⁺]i laukinio tipo (WT) HeLa ląstelėse nepasižyminčiose Cx37 raiška. Propofolio koncentracijos, kurios yra mažesnės nei 35 µM, [Ca²⁺]i reikšmingai nedidina, tačiau reikšmingas [Ca²⁺]i padidėjimas pastebėtas naudojant 60 µM ir didesnes propofolio koncentracijas. [Ca²⁺]i nepriklausė nuo propofolio poveikio laiko HeLa WT ląstelėms. Elektrofiziologiniai tyrimai parodė, propofolio slopinamąjį poveikį Cx37 puskanalių laidumui. Mūsų rezultatai rodo, kad didinant propofolio koncentraciją, Cx37 puskanalių laidumas mažėja. Tuo tarpu tiriant laidumo priklausomybę nuo įtampos, įtakos turėjo tik 5 µM propofolio koncentracija, kuri pasižymi nedideliu slopinamuoju poveikiu Cx37 puskanalių laidumui, tačiau 90 µM propofolio koncentracija, kuri Cx37 puskanalių laidumą slopino ~4 kartus daugiau, jų laidumo priklausomybės nuo įtampos nepaveikė.