Kvercetino biologinio poveikio C6 ląstelėms tyrimas
Budrys, Dovydas |
Recenzentas / Reviewer | |
Recenzentas / Reviewer |
Dovydo Budrio baigiamasis bakalauro darbas – „Kvercetino biologinio poveikio C6 ląstelėms tyrimas“. Mokslinio darbo vadovė prof. dr. Daiva Majienė, konsultantas doc. dr. Julius Liobikas; Lietuvos sveikatos mokslų universitetas, Neuromokslų institutas, Biochemijos laboratorija. Tyrimo tikslas: Ištirti ir palyginti įvairių koncentracijų kvercetino tirpalo gebą neutralizuoti vandenilio peroksidą, įtaką žiurkių glioblastomos C6 ląstelių kultūros viduląstelinių aktyvių deguonies formų kiekiui bei gyvybingumui.
Tyrimo uždaviniai:
- Nustatyti vandenilio peroksidą neutralizuojančias kvercetino tirpalo koncentracijas.
- Ištirti ir palyginti skirtingų koncentracijų kvercetino tirpalo įtaką viduląstelinių aktyvių deguonies formų gamybai esant oksidaciniam stresui C6 ląstelių kultūroje.
- Nustatyti ir palyginti skirtingų koncentracijų kvercetino tirpalo poveikį C6 ląstelių kultūros gyvybingumui esant oksidaciniam stresui.
Metodai: Vandenilio peroksidą neutralizuojančias skirtingas kvercetino tirpalo koncentracijas nustatėme Amplex Red metodu, įtaką viduląstelinių aktyviųjų deguonies formų gamybai vertinome DCFH2-DA metodu, ląstelių gyvybingumą vertinome naudodami MTT dažą bei kitu metodu dažydami ląsteles propidžio jodido ir Hoechst 33442 fluorescencinais dažais.
Rezutatai: Nustatyta, jog (10 – 100 µg/ml) kvercetino tirpalo koncentracijos mažino vandenilio peroksido koncentraciją. Rezultatai parodė, kad esant oksidaciniam stresui tik ≥ 40 µg/ml kvercetino tirpalo koncentracijos reikšmingai sumažino viduląstelinių radikalų gamybą ląstelėse tam tikru laiko momentu lyginant su kontrole. Nustatyta, jog optimaliausia koncentracija, kuri didino ląstelių gyvybingumą esant oksidaciniam stresui buvo 40 – 50 µg/ml, o didėjant kvercetino koncentracijai – ląstelių gyvybingumas mažėjo.
Išvados: Visos tirtos kvercetino tirpalo koncentracijos (10 – 100 µg/ml) tendencingai mažino vandenilio peroksido koncentraciją. Kvercetino tirpalai priklausomai nuo koncentracijos ir inkubacijos laiko turėjo įtakos viduląstelinių aktyvių deguonies formų gamybai esant oksidaciniam stresui. Kvercetino poveikis ląstelių gyvybingumui oksidacinio streso sąlygomis priklauso nuo jo koncentracijos.
Dovydas Budrys’ Bachelor’s thesis – “Biological effects of quercetin on C6 cells”. Academic supervisor prof. dr. Daiva Majienė, academic advisor doc. dr. Julius Liobikas; Lithuanian University of Health Sciences, Neuroscience Institute, Biochemistry laboratory. The aim of this research: To investigate and compare the ability of different concentrations of quercetin solution to neutralise hydrogen peroxide, the effect on the content of intracellular active oxygen species and viability of rat glioblastoma C6 cell culture.
Goals of the study:
- Determine the hydrogen peroxide neutralizing concentrations of the quercetin solution.
- To investigate and compare the effect of different concentrations of quercetin solution on the generation of intracellular reactive oxygen species under oxidative stress in C6 cell culture.
- To determine and compare the effect of different concentrations of quercetin solutions on the viability of C6 cell culture under oxidative stress.
Methods: The hydrogen peroxide neutralizing effect of different concentrations of quercetin solution by Amplex Red staining, the effect on the generation of intracellular reactive oxygen species by DCFH2-DA staining, the viability of the cells by MTT staining and by staining with the fluorescent dyes propidium iodide and Hoechst 33442.
Results: Concentrations of quercetin solutions (10 - 100 µg/ml) were found to decrease hydrogen peroxide concentrations. The results showed that under oxidative stress, only concentrations of quercetin solutions ≥ 40 µg/ml significantly decreased intracellular radical production at a given time point compared to the control. The most significant concentrations that increased cell viability under oxidative stress was found to be 40 – 50 µg/ml, with a decrease in cell viability with increasing concentrations of quercetin.
Conclusions: All concentrations of quercetin solutions tested (10 - 100 µg/ml) were found to decrease the concentration of hydrogen peroxide. Quercetin solutions affected the generation of intracellular reactive oxygen species under oxidative stress in a concentration- and incubation time-dependent manner. The effect of quercetin on cell viability under oxidative stress has been found to be concentration dependent.